荧光偏振免疫分析法与化学发光酶免疫法测定人血浆茶碱浓度

医药导报2006年5月第25卷第5

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荧光偏振免疫分析法与化学发光酶免疫法

3

测定人血浆茶碱浓度

杨秀斐,余玉木,徐 克

1

2

2

(1.温州医学院药学院,325000;2.浙江省温州市第二人民医院药剂科,325000)

[摘 要] 目的 比较荧光偏振免疫分析法与化学发光酶免疫法测定茶碱血药浓度的结果,以指导临床合理用

药。方法 用荧光偏振免疫分析法与化学发光酶免疫法平行测定18。结果 两种方法之间有良好的线性关系,比较线性回归方程为Y=0.8305X+0.7,相关系数r0.3;144例次茶

21

碱血药浓度测定结果表明,1..62)・L(P

0.05),18例患者茶碱药时数据经计算机拟合,均呈单室开放模型。结论 两法

均准确、灵敏、稳定,且均具特异性,但从经济学角度考虑。

[关键词] 氨茶碱;[中图分类号] .[文章编号] 100420781(2006)0520403202

  ,、慢性支气管哮喘,(成人安全血药浓度为5~20mg・L21,儿童安全血药浓度为6~12mg・L21),且其血药浓度个体差异较大,易产生心悸、心律失常、血压下降等不良反应甚至危及患者(尤其是儿童)的生命。目前国内茶碱的测定方法有荧光偏振免疫分析法(FPIA)、化学发光酶免疫法(CLEIA)、高效液相色谱法(HPLC)、紫外分光光度法(UV)、放射免疫法(RIA)、匀相酶标放大免疫法(EMIT)、克隆化酶供体免疫分析法(CEDIA)等,为保证安全有效地使用该药,临床需寻找一种准确、快速且简便的定量测定血药浓度的方法。文献

[1]报道了对各测定方法的比较,但对FPIA与CLEIA法的比较

1.2 试剂 茶碱缓释片(商品名:舒弗美,广东迈特兴华制药

公司生产,规格:每片0.1g,批号:010802);茶碱荧光偏振免疫法(FPIA)检测试剂(美国雅培公司生产,批号:83836Q100);化学发光酶免疫法(CLEIA)茶碱检测试剂由美国贝克曼公司提供。

1.3 临床资料 诊断为慢性阻塞性肺疾病(COPD)的老年患

者共18例,其中男14例,女4例,年龄63~90岁,平均(65±

12)岁,经检查肝、肾功能正常,无烟、酒等不良嗜好或已戒断

烟、酒>2a。

1.4 血样的采集 所有患者均口服茶碱缓释片,每次0.1g,qid,连用3d,第4天早晨服茶碱缓释片前(0h)及服茶碱缓释

笔者尚未见报道。笔者在本实验中采用以上两法平行测定茶碱血药浓度的结果,并对两种方法的药动学参数进行了比较。

1 材料与方法 

1.1 仪器 TDXFLX荧光偏振免疫分析仪(美国雅培公司),ACCESS粒子全自动化学发光酶免疫分析系统(美国贝克曼公

片后0.5,1,2,4,6,8,12h通过留置针采集静脉血各1mL,抽得的血样立即离心分离出血清,220℃保存待测,所得血清样本共

144份。实验期间均进食普通饮食,禁饮(食)茶、咖啡、巧克力

等饮料及一切已知对茶碱吸收代谢有影响的药物。

1.5 测定方法 化学发光酶免疫法采用微粒子固相免疫竞争

司)。

[收稿日期] 2005207219   [修回日期] 2005210208[基金项目] 3温州市科技发展计划立项课题(基金编号:S2001A10)

[作者简介] 杨秀斐(1969-),女,浙江温州人,副主任药师,学

法。原理:顺磁性铁固体颗粒外包被羊抗兔IgG与包被茶碱单克隆抗体结合后再与抗体标本中的茶碱或定量标记的碱性磷酸酶茶碱竞争,形成免疫复合物,用缓冲液洗掉未结合的标记物,再加碱性磷酸酶发光底物Lumi2phos3530,底物去磷酸化放出光,测定其放出的光量子与标准比较定量[2][线性范围0~40

2121

mg・L,最低检测浓度为0.5mg・L,方法回收率(100±

士,从事医院药学工作。电话:0577-88070181,E2mail:[email protected]

com。

3)%,批间RSD为4.34%,批内RSD为3.70%]。荧光偏振免

・404・

疫分析法是根据荧光偏振原理建立的一种免疫分析法,已自动化,使用时根据药物放入相应的试剂盒,仪器自动辨别试剂并调用相应的标准曲线,启动面板上的按钮后仪器自动操作,最后仪器将测得的偏振度换算成药物浓度,并由终端显示和打印出来[线性范围0~40mg・L,最低检测浓度为0.82mg・L,方法回收率(100±3)%,批间RSD为4.58%,批内RSD为

5.88%]。

1.6 统计学方法 将144份次血清样本用FPIA法与CLEIA

21

21

HeraldofMedicineVol125No15May2006

值的相差程度,求得药动学参数,并以成对t检验分析同一患者以两法得到的两组药动学参数之间的差异。

2 结果 

2.1 方法相关性 采用FPIA法与CLEIA法测得的144例次

茶碱血药浓度的比较线性回归方程为Y=0.8305X+0.8757,相关系数r=0.9913,结果表明两者呈高度相关。

2.2 测定结果与药动学参数的比较 144例次茶碱血药浓度

测定结果表明,FPIA法所得的测定结果比CLEIA的测定结果

21

低,平均低(1.81±0.62)mg・L,两组比较,P

法测得的血药浓度结果进行线性回归,求得回归方程及相关系数;采用南京军区总医院提供的PKBP2N1程序包对18例患者茶碱药2时数据进行药动学模型拟合,根据房室模型判断指标

(AIC)判断房室模型,残差平方和(RE)作为判断实测值与计算方法

FPIA法CLEIA法

例数

1818

0h7.19±1.957.69±1.73

0.5h7.59±1.857.98±1.95

1h8.41±1.818.94±1.92

2h

法测得的茶碱平均血药浓度见表1。18例患者茶碱药时数据经计算机拟合,均呈单室开放模型,两法所得结果如表2,均差异无显著性。

mg・L21,±s

6h8.56±1.719.03±1.75

8h7.81±1.678.52±1.81

12h6.72±1.627.07±1.70

±s

AUC/(mg・h・L21)

                表1 FPIA法和CLEIA法测得的茶碱平均血药浓度 

4h9.07±1.799.95±1.84

9.03±1.819.90±1.79

              表2 FPIA法和CLEIA法测得的茶碱平均血药浓度结果拟合的药动学参数 方法FPIA法CLEIA法

例数

1818

t/h

t/h

C/(mg・L21)

20.24±8.9521.45±8.36

3.17±1.103.26±1.10

9.24±1.7853±2.24

04±34.1818±45.09

3 讨论 ,,但FPIA比

IA判断用于TDM分析方法有效性的标准首先是方法回收率高、变异系数低、专一性强,其次是分析周期短、成本低。FPIA

21

法对茶碱的线性范围为0~40mg・L,0.21

mg・L,操作重现性好,,)检测速度快(15,期较长。是目前TDM,尤其适用于临,但仪器及试药的价格较高,限制了其在中小医院的推广应用。

ACCESS粒子全自动化学发光酶免疫分析系统在检测过程中采用全自动精确的加样系统、恒温系统、试剂冷藏系统、超声波清洗、磁场分离系统和中心数据处理系统等,可尽可能减少实验误差。其试剂盒采用多层覆膜设计,加样后自动封闭,保证了试剂的质量,CLEIA试剂盒的有效期为0.5~1a,较FPIA法短。从标本上机到出第1个测试结果只需16min,检测时间短而且可以随时插入标本,测定灵敏度高(相当于10212g水平),又无污染,样本用量少,能满足临床的即时需求,最显著的优点是成本

[3]

仅为FPIA法的1/5,但其缺点是定标有效期只有14d。

,,这说明

IA法和CLEIA法同样可用于临床药动学研究及给药方案设

计,必要时对偏低的测定结果可根据两种方法的相关方程进行校正,说明两种方法可以相互代替。另外,CLEIA法在准确度、精密度、检测限、定量限、专属性、稳定性等效能指标均可与

FPIA法相媲美,然而,从经济学角度考虑,CLEIA法更适用于茶

碱的临床检测。

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高效液相色谱法同时测定

人血浆1’2羟基咪达唑仑与咪达唑仑含量

田志松

(湖南省湘西自治州人民医院药剂科,吉首 416000)

[摘 要] 目的 建立同时检测1’2羟基咪达唑仑和咪达唑仑血药浓度的高效液相色谱法。方法 采用Zirchrom

反相柱(KromasilC18,250

mm×4.6mm,5μm);柱温:40℃;流动相:醋酸铵水溶液2甲醇(35∶65,V/V);流速:1.5


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