中药益智仁盐炙工艺的正交实验法研究

中药益智仁盐炙工艺的正交实验法研究

(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)

作者:李兴迎 胡昌江 林辉 黄勤挽 李兴华

【摘要】 目的优选盐炙益智仁的最佳工艺。方法采用正交设计L9(34),以挥发油、水浸出物和诺卡酮(nootkatone)的含量为考察指标。结果最佳盐炙工艺为100 g饮片,用2 g食盐加40 ml水溶解后,与益智仁拌匀,闷润30 min,在250℃下炒炙8 min。结论优选得到的工艺稳定、合理、可行。

【关键词】 益智仁;炮炙;正交实验

Abstract:ObjectiveTo optimize the technology of processing Ructus Alpiniae Oxyphyllae. MethodsOrthogonal design L9(34) was used to screen out the best extraction conditions with naphtha,the percentages of water- soluble components and the content of Nootkatone as indexes. ResultsThe optimal procedure was set as follows:fructus alpiniae oxyphyllae was added with 2% salt and mixed homogeneously at 250℃ for 8 min .ConclusionThe technology is stable, reasonable and viable.

Key words:Fructus Alpiniae Oxyphyllae; Processing; Orthogonal designs

益智是姜科植物益智Alpinia oxyphylla Miq.的干燥成熟果实。中医临床使用益智仁主要分为生品和盐炙品,生品性温味辛,主归脾、肾经,具有温脾止泻,摄唾涎,治疗脾寒泄泻、腹中冷痛、口多唾涎等疾病;而盐炙品可缓其辛燥,主入肾经,以补肾缩尿涩精为主[1],治疗肾虚遗尿、小便频数、遗精白浊等疾病。

《中国药典》2005版Ⅰ部对益智仁的炮制仅规定了盐炙法[2],传统的炮制方法是盐水拌润后用文火炒干,缺乏对火力、火候等相关量化参数,不能保证工艺的重复性和饮片质量的稳定性。本工艺选择闷润时间、炒制时间、炒制温度这3个主要因素,采用正交实验设计L9(34),以益智仁中的诺卡酮(Nootkatone)及水浸出物、挥发油的含量为指标,对盐炙益智仁的炮制工艺进行优选,确定盐炙益智仁的最佳炮制工艺,为益智仁饮片炮制的规范化、产业化和盐炙共性技术的研究提供了参考依据。现报道如下。

1 仪器与材料

1.1 仪器

日本岛津LC-l0A高效液相色谱仪(SPD-10AVP紫外检测器、SCL-6A系统控制器、TC-100恒温箱、LC2000色谱数据工作站),KUUDOS SK250HP型超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司),BP211D AG电子天平(德国Sartorius),TU-1001型紫外一可见分光光度计(北京普析科学仪器有限公司),正德牌远红外可控温电炉(功率

45~2 000 W),红外测温仪(smart仪器有限公司)。

1.2 试药

Nootkatone对照品(购买于Alfa Aesar,批号10112423,含量大于98%),乙腈为色谱纯,水为重蒸水,其余试剂均为分析纯。

1.3 药材

购于成都五块石药材市场,经本校生药教研室李敏教授鉴定确认为《中国药典》规定的姜科植物益智Alpinia oxyphylla Miq.的干燥成熟果实。将益智去壳得到益智仁饮片。

2 方法与结果

2.1 盐炙益智仁样品的制备

按正交实验设计安排益智仁炮制实验(表1,表2),称取益智仁饮片分别加入2%的盐(预先用药材量40%水溶解,再均匀喷洒),闷润不同时间,然后置于设定不同温度的锅中,不停翻炒直至设定的时间,立即取出,摊放至凉,装袋备用。表1 正交实验因素及水平设计(略)

2.2 挥发油含量测定

照挥发油测定法《中国药典》2005年版附录XD甲法项下规定操作,以饮片形式,在筛选提取条件(加12倍量水,浸泡2 h,提取8 h)的基础上进行测定。结果见表2。

2.3 水浸出物含量测定

按《中国药典》2005年版附录XA下热浸法进行测定。结果见表2。

2.4 Nootkatone含量测定结果见表2。表2 实验安排及结果(略)

2.4.1 色谱条件

色谱柱为diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)。流动相为乙腈-水(70∶30);流速1.0 ml/min;检测波长235 nm;柱温35℃。理论塔板数按nootkatone峰计算为3 000以上。同时取阴性供试品溶液进样,结果表明,阴性供试品在nootkatone色谱峰位置处无相应峰出现。对照品阴性及样品供试品的高效液相色谱图。见图1~3。

2.4.2 对照品溶液的配制

精密称取对照品Nootkatone 24.18 mg置于25 ml容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,精密移取1 ml于25 ml容量瓶中,加甲醇定容至刻度,摇匀即得浓度为0.038 69 mg/ml的对照品溶液。

2.4.3 供试品溶液的制备

经筛选后为:精密称取盐益智仁粗粉约1 g置于25 ml容量瓶中,加入20 ml甲醇超声提取30 min,放冷后滤至25 ml容量瓶中,残渣用适量甲醇洗涤,滤过,合并滤液,定容至25 ml。精密量取此溶液1 ml至10 ml容量瓶中,加入甲醇定容,用0.45 μm微孔滤膜过滤,吸取续滤液进样,测定其含量。

2.4.4 线性关系的考察精密量取Nootkatone对照品溶液(0.038 688 mg/ml) 2, 4, 6. 8, 10,12 μl进样,记录色谱图,测定其峰面积,并以峰面积值(A)对进样量(C)进行回归,得标准曲线方程A=1E+07C-412 65,r=0.999 5。结果表明,在0.077 38~0.464 26 μ

g范围内,线性关系良好。

2.4.5 精密度实验精密吸取上述对照品溶液10 μl,重复进样5次,Nootkatone峰面积的RSD=0.91%。结果表明,精密度良好。

2.4.6 稳定性实验

取样品供试液20 μl,分别于0, 2, 4, 6, 8 h进样,测得样品中峰面积值的RSD=0.95%,结果表明供试品溶液在8 h内稳定。

2.4.7 重复性实验

按拟定的含量测定方法,对同一批样品,分别制备供试品液,测得峰面积值并计算含量,RSD=1.55%。结果表明该方法重复性良好。

2.4.8 回收率实验

取已知含量的样品约0.5 g,精密称定后,分别加入对照品溶液(0.967 2 mg/ml)按上述样品制备方法和色谱条件,制备加样回收供试品溶液并进样,测定含量,Nootkatone平均回收率为96.90%,RSD=1.6%(n=6)。结果见表3。

2.4.9 样品含量测定取盐炙样品,按照“2.4.3”项操作,进样20 μl注入液相色谱仪,按照上述条件测定,计算Nootkatone含量。

2.5 结果分析

采用 综合加权评分法,挥发油含量以含量较高为好,把第8号实验定为100分,宜用公式y1 =100 Y1/1.260;水浸出物以含量较高为好,把第3号实验定为100分,宜用公式y2 =100 Y2/22.456;Nootkatone的含量以含量较高为好,把第5号实验定为100分,宜

g范围内,线性关系良好。

2.4.5 精密度实验精密吸取上述对照品溶液10 μl,重复进样5次,Nootkatone峰面积的RSD=0.91%。结果表明,精密度良好。

2.4.6 稳定性实验

取样品供试液20 μl,分别于0, 2, 4, 6, 8 h进样,测得样品中峰面积值的RSD=0.95%,结果表明供试品溶液在8 h内稳定。

2.4.7 重复性实验

按拟定的含量测定方法,对同一批样品,分别制备供试品液,测得峰面积值并计算含量,RSD=1.55%。结果表明该方法重复性良好。

2.4.8 回收率实验

取已知含量的样品约0.5 g,精密称定后,分别加入对照品溶液(0.967 2 mg/ml)按上述样品制备方法和色谱条件,制备加样回收供试品溶液并进样,测定含量,Nootkatone平均回收率为96.90%,RSD=1.6%(n=6)。结果见表3。

2.4.9 样品含量测定取盐炙样品,按照“2.4.3”项操作,进样20 μl注入液相色谱仪,按照上述条件测定,计算Nootkatone含量。

2.5 结果分析

采用 综合加权评分法,挥发油含量以含量较高为好,把第8号实验定为100分,宜用公式y1 =100 Y1/1.260;水浸出物以含量较高为好,把第3号实验定为100分,宜用公式y2 =100 Y2/22.456;Nootkatone的含量以含量较高为好,把第5号实验定为100分,宜

用公式y3 =100 Y3/3.82。根据本例研究的目的,其权重系数为挥发油含量(y1)为0.3,水浸出物(Y2)为0.3,Nootkatone(y3)的含量为0.4,对3个单项相加,用公式Y=0.3y1+0.3y2+0.4y3=22.06y1+1.34y2+10.47y3求出各号的综合评分。结果见表3。表3 回收率实验结果(略)

2.6 方差分析见表4。表4 方差分析(略)

结果表明,B因素炮制时间、C因素炮制温度对实验结果有显著影响,A因素闷润时间无明显影响,综合考虑盐炙后便于饮片干燥及成品水分含量等因数,盐炙益智仁的最佳工艺组合确定为:A1B2C2,即100 g益智仁用食盐2 g加40 ml水溶解,与益智仁拌匀,闷润30 min在250℃炒炙8 min。

2.7 验证实验称取同批药材3份各100 g,按照优选的炮制工艺即用2 g食盐加40 ml水溶解后,与益智仁拌匀,闷润30 min,与益智仁拌匀,闷润30 min在250℃下炒炙8 min的条件进行重复实验。结果见表5。表5 验证实验(略)

3 讨论

经过研究确定盐炙益智仁的最佳工艺为:A1B2C2,即100 g益智仁用食盐2 g加40 ml水溶解,闷润30 min,在250℃炒炙8 min。实验证明其方法是稳定、合理、可行的,能适应于该饮片的工业化、规范化生产。

我们采用Nootkatone、挥发油、水浸出物的量化指标,综

合评判益智仁盐炙的炮制工艺,使其火候评判客观化,克服传统单凭经验判断火候因人而异的主观性,使其方法更加科学、合理和可行。

【参考文献】

[1]原思通.医用中药饮片学[M].北京:人民卫生出版社,1999:437.

[2]国家药典委员会.

业出版社,2005:204.

S].北京:化学工中国药典,Ⅰ部[


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